高压蒸汽灭菌后，正确的操作步骤至关重要。在打开排气阀前，必须确保压力已降至零，这是为了防止内部的培养基因内外压力差异而发生复沸腾，可能导致液体溢出或棉塞沾湿，引发安全事故。当压力降到0.05MPa时，可以开始缓慢放气，此时再进行开盖取物，以防止培养基在温度降低过程中发生成分变化，影响后续的实验操作。
在操作过程中需要注意以下几点：首先，包裹物的大小和紧密程度应适宜，一般小于30cm×30cm×50cm，避免阻碍蒸汽的流通。其次，包裹不宜排得太密，以确保灭菌效果。压力、温度和时间达到设定标准后，指示带和化学指示剂会显示灭菌已完成。对于易燃易爆物品，如碘仿、苯类，应避免使用高压蒸汽灭菌。此外，锐利的器械如刀、剪也不宜用此法，以免变钝。在瓶装液体灭菌时，需用玻璃纸和纱布包裹瓶口，并在必要时插入针头排气。操作过程中应由专人负责，定期检查安全阀，确保设备安全运行。每次灭菌后，要记录日期并注明保存时限，一般为1-2周。
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